Nukleīnskābju sintēzi veic, izmantojot cietās fāzes sialamīda triglicerīdu metodi, kurā DNS 3' gals tiek imobilizēts uz cietās fāzes substrāta un nukleotīdi tiek pievienoti 3′ līdz 5′ virzienā, līdz tiek sintezēts vēlamais DNS fragments. .Tas atšķiras no DNS sintēzes, izmantojot DNS polimerāzi.
Pirmās bāzes 3′ gals tiek imobilizēts uz CPG sintēzes laikā, nākamās bāzes 5′-OH ir aizsargāts ar di-p-toliltritil-DMT, aminogrupa uz bāzes tiek aizsargāta ar benzoskābi un 3′. Pēc tam -OH tiek aktivizēts ar aminofosfāta savienojumu.1 bāze no 5 5′-OH no 1 bāzes un 3′-OH no nākamās bāzes veido fosfīta triglicerīdu, kas pēc tam tiek oksidēts ar jodu līdz fosfāta triglicerīdam, aizsargviela uz otrās bāzes 5′-OH tiek noņemta ar pievienojot dihloretiķskābi DM, ciklos, pievienojot nākamo bāzi, un pēc sintēzes 5′-OH aizsargviela tiek noņemta ar vāju skābi. Fragments tiek atvienots no cietajiem sveķiem ar koncentrētu amonija hidroksīdu, aizsargviela tiek noņemta no bāzes. ar koncentrētu amonija hidroksīdu karsējot, amonija hidroksīdu atdala, fragmentu žāvē vakuumā un nukleīnskābi attīra ar šķidruma hromatogrāfiju vai PAGE.
Oligo sintēzes soļi
Atbloķēšana
The5 galu DMT aizsarggrupa tiek noņemta, pievienojot TCA šķīdumu.
Aktivizēšana
Aktivatora sajaukšana ar oligonukleotīda monomēru, lai izveidotu aktīvo oligonukleotīda monomēra starpproduktu.
Sakabe
5-gala hidroksilgrupa reaģē ar aktīvo oligonukleotīdu starpproduktu antiģeneratīvā kondensācijas reakcijā, veidojot nestabilu fosfīta triglicerīdu saiti.
Ierobežošana
Ierobežojošā līdzekļa pievienošana veic acetilēšanas noslēgšanas reakciju ar liekām hidroksilgrupām, kas nav iesaistītas kondensācijas reakcijā.
Oksidācija
Joda šķīduma, kas satur ūdeni, pievienošana oksidējoties reaģē ar nestabilām fosfīta saitēm, veidojot stabilas fosforskābes triglicerīdu saites.
Cianoetilšķelšanās
Nukleīnskābes produkts pēc sintēzes, pievienojot DEA šķīdumu, lai atdalītu ciānetilgrupu no fosfāta triglicerīdu saites.
Sašķelts un aizsardzības noņemšana
Nukleīnskābju fragmentus atdala no cietās fāzes nesēja, pievienojot koncentrētu amonija hidroksīda šķīdumu, un pēc tam karsē, lai noņemtu aizsarggrupas no bāzu ūdeņraža saitēm.
Izlikšanas laiks: 21. novembris 2022