DNS sintēzes pamatprincips

Ķīmiskās DNS sintēzes pamatā ir cietās fāzes sintēzes stratēģija un fosforamidīta ķīmija.Atšķirībā no bioloģiskās DNS sintēzes ķīmiskās DNS sintēzes materiāls ir DMT (4,4-dimetoksitritils) un fosforamidīta modificēts dezoksiriboksisīds, kā parādīts 1. attēlā. DNS sintēze tiek veikta uz cieta nesēja (mēs varam piedāvāt dažādusOligo sintēzes kolonna), ti, CPG (kontrolētu poru stikls) un PS (polistirols), un visa sintēze tiek veikta uzDNS/RNS sintezators, kas ir mūsu galvenais aprīkojums, ir atšķirīgs modelis, piemēram: HY viena kanāla sintezators, HY-12, HY-192 utt., sintēzes virziens ir no 3' līdz 5', un nukleotīds tiek ievadīts cietajā balstā, izmantojot vienu sintēzes cikls.Parasti sintēzes ciklā ir četri posmi: aizsardzības noņemšana, savienošana, vāciņš un oksidēšana (2. attēls).Deprotection ir iestatīts, lai noņemtu DMT grupu uz cietā nesēja vai 5' hidroksilgrupu uz iepriekšējā nukleozīda, 3% trihloretiķskābi dihlormetānā izmanto kā aizsardzības reaģentu.Pēc tam ar aktivatora, ti, 5-etiltiotetrazola vai 4,5-dicianoimidazola, palīdzību tika ļauts fosforamidīta modificētajam dezoksiriboksisīdam pakļaut hidroksilgrupai, veidojot fosfitetriesteri (III), un tika realizēts Savienošanas solis.Ierobežošanas posms tiek veikts, lai savienošanas posmā bloķētu nereaģējušo hidroksilgrupu, lai samazinātu nevēlamu defektu secību veidošanos.Visbeidzot, nestabilais fosfitetriesteris (III) tiek oksidēts par ķīmiski stabilu fosfortriesteri (V) ar jodu kā oksidētāju piridīna klātbūtnē.

Sintezētā DNS var tikt atdalīta no cietā nesēja ar aminolīzi, 2-cianoetilaizsargātā grupa uz fosfortriestera un amīds uz nukleobāzes tiek šķeltas vienlaikus, sintēzes plāksnes un sintēzes kolonnas statīvās tiek ievietotas tieši reakcijas kamerā. noAizsardzības iekārtas.Neapstrādātu DNS var sagatavot ar HPLC, elektroforēzi un OPC pēc pieprasījuma, mēs varam arī jums nodrošinātAttīrīšanas iekārtaspēcapstrādei.