Faktori, kas nosaka DNS sintēzes efektivitāti

Tipiskā DNS, RNS un nedabisku nukleīnskābju sintēzē izšķiroša nozīme ir aizsardzības un savienošanas posmam.

Aizsardzības noņemšanas solis ir noņemt DMT grupu uz cietā nesēja vai 5' hidroksilgrupu no iepriekšējā nukleozīda ar organisko skābi un pakļaut hidroksilgrupu nākamajam savienošanas posmam.3% trihloretiķskābi dihlormetānā vai toluolā galvenokārt izmanto, lai veiktu aizsardzības atdalīšanas posmu.Trihloretiķskābes koncentrācija un aizsardzības noņemšanas laiks (atbloķēšanas laiks) dominē galaproduktu tīrībā.Zema koncentrācija un nepietiekams atbloķēšanas laiks atstāj nereaģētu DMT grupu, kas samazina iznākumu un palielina nevēlamo piemaisījumu daudzumu.Ilgais atbloķēšanas laiks var izraisīt sintezēto secību depurīnu, veidojot negaidītus piemaisījumus.

Savienojuma solis ir jutīgs pret šķīdinātāju ūdens saturu un mitrumu gaisā.Ūdens koncentrācijai sintēzē jābūt mazākai par 40 ppm, labāk mazākai par 25 ppm.Lai saglabātu bezūdens sintēzes stāvokli, nukleīnskābju sintēze jāveic vidē ar zemu mitruma līmeni, tāpēc iesakām mūsu klientam izmantotAmidītu izšķīdinātas iekārtas, kas var izšķīdināt pulverveida vai eļļaino fosforamidītu bezūdens acetonitrilā, lai izvairītos no saskares ar gaisu.

Faktori, kas nosaka DNS sintēzes efektivitāti5
Faktori, kas nosaka DNS sintēzes efektivitāti4

Tā kā fosforamidīti šķīst, tas ir labāks situācijās, kad nav ūdens, un molekulārie slazdi adsorbē ūdens pēdas reaģentos un amidītā, ir jāsagatavoMolekulārie slazdi.Mēs iesakām 2 g sietu 50-250 ml reaģentu pudelēm, 5 g 250-500 ml reaģentu pudelēm, 10 g 500-1000 ml reaģentu pudelēm un 20 g 1000-2000 ml reaģentu pudelēm.

Fosforamidītu šķīdināšana jāveic inertā atmosfērā un savlaicīgi jāpabeidz aktivatora reaģentu un acetonitrila nomaiņa.Aizvākošanas un oksidēšanas reaģenti jāizmanto pēc iespējas ātrāk, atvērtie reaģenti nodrošina mazāku glabāšanas laiku un mazāku aktivitāti sintēzes laikā.


Publicēšanas laiks: 09.09.2022